抄訳
AlaEは細胞内に過剰に蓄積したL-アラニンを細胞外に排出することで細胞の恒常性を維持する機能を担う。AlaEの構造に関する情報は少なく、基質排出のメカニズムは明らかになっていない。また、AlaEは149のアミノ酸残基からなる小さい輸送体であるため、オリゴマーを形成する可能性が考えられる。本研究では、架橋試薬による修飾実験やプルダウンアッセイを実施し、AlaEがホモオリゴマーを形成することを示した。また、これまでの研究でAlaEの第4膜貫通領域(TM4)上に存在するGxxxGモチーフが機能に重要である可能性が示唆されていた。本研究ではTM4の重要性を明らかにするため、TM4のアミノ酸残基をアラニン残基に置換した変異体を作製して活性を評価した。その結果、GxxxGモチーフ周囲のアミノ酸残基の置換体は低いL-アラニン排出活性を示し、TM4のGxxxGモチーフが基質の排出に重要であることが明らかとなった。次に、このモチーフがオリゴマー形成に関与するかどうかをプルダウンアッセイで評価した結果、AlaE変異体は依然としてオリゴマーを形成した。以上より、TM4のGxxxGモチーフはAlaE活性に不可欠な役割を果たすが、AlaEオリゴマーの形成には関与しないことが示された。